HPV HR DNA (14 typów) + p16 i Ki67 ekspresja białek
HPV HR DNA (14 typów) + p16 i Ki67 ekspresja białek. Identyfikacja metodą łańcuchowej reakcji polimerazy w czasie rzeczywistym (Real-Time PCR) materiału genetycznego 14 typów wirusa HPV wysokiego ryzyka (HR), z rozróżnieniem wirusów typu 16,18 i 45 oraz z wykazaniem obecności wirusów z grupy A (typy: 31, 33, 52, 58) i B (typy: 35, 39, 51, 56, 59, 66, 68), połączona z cytochemiczną identyfikacją ekspresji białek p16/Ki-67 w materiale cytologicznym z dróg rodnych.
Identyfikacja Real-Time PCR materiału genetycznego 14 typów wirusa HPV wysokiego ryzyka (HR), z rozróżnieniem wirusów typu 16,18 i 45 oraz z wykazaniem obecności wirusów z grupy A (typy: 31, 33, 52, 58) i B (typy: 35, 39, 51, 56, 59, 66, 68), połączona z cytochemiczną identyfikacją ekspresji białek p16/Ki-67 w materiale cytologicznym z dróg rodnych. HPV (ang. human papilloma virus), wirus brodawczaka ludzkiego, z rodziny Papillomaviridae, jest bezotoczkowym, wirusem DNA, z kołowym dwuniciowym DNA o ciężarze 7–8 kbp. Ponad 200 typów chorobotwórczych HPV zaszeregowano do pięciu rodzajów: Alpha-, Beta-, Gamma-, Mu- i Nupapillomavirusów. HPV wykazuje wysoki tropizm do komórek warstwowego nabłonka płaskiego, przy czym replikuje wyłącznie w komórkach ulegających proliferacji. Po wniknięciu do komórki wirus może pozostać w stanie utajonym lub ulegać aktywnej replikacji. Atakujący skórę lub błonę śluzową HPV wykorzystuje skomplikowany proces odnowy wielowarstwowego nabłonka płaskiego. Zakażenie HPV jest najczęstszą infekcją przenoszoną drogą płciową. Poza kontaktami seksualnymi wszystkich rodzajów, HPV przenoszą się również przez kontakt dotykowy, kontakt ze skażoną odzieżą, ręcznikami etc. i rzadko na drodze okołoporodowej transmisji na dzieci matek z brodawkami narządów płciowych. Większość zakażeń HPV przechodzi bezobjawowo lub wiąże się z niegroźnymi i ustępującymi samoistnie konsekwencjami klinicznymi, jednak przewlekłe zakażenie pewnymi typami HPV może ulec progresji nowotworu złośliwego. Wywołane przez HPV zmiany łagodne: brodawczaki i brodawki rozwijają się w wielu lokalizacjach: na skórze, wardze, w jamie ustnej, na powiece, spojówce, języku, w gardle i części ustnej gardła, w krtani i górnej tchawicy, w przełyku, w szyjce macicy, układzie narządów płciowych i odbycie. Są zakaźne, a zakaźność zależy niekiedy od lokalizacji zmiany. Głównym powodem zainteresowania HPV jest jego potencjał onkogenny. Związek z chorobami nowotworowymi przypisywany jest ok. 100 typom HPV, przy czym większość z nich należy do grup o średnim i niskim ryzyku indukcji nowotworu. Przesłanką o potencjale onkogennym danego typu HPV jest identyfikacja jego DNA w genomie komórek transformowanych nowotworowo. Do HPV wysokiego ryzyka, HR (ang. high risk) na ogół zalicza się 14 typów: 16, 18, 45 oraz 31, 33, 35, 39, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Typami HPV niskiego ryzyka, LR (ang. low risk) są: 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61 i 72 powodujące zmiany łagodne. 13 typów HPV uznaje się za prawdopodobnie rakotwórcze lub średniego ryzyka, stąd, listy wirusów wysokiego i niskiego ryzyka mogą się niekiedy różnić. Około 70% przypadków inwazyjnego raka szyjki macicy na świecie wywoływanych jest wirusem HPV 16, HPV 18 oraz HPV 45. HPV-6 i 11 są odpowiedzialne za 95-100% brodawek narządów płciowych u kobiet i mężczyzn.
W badaniu identyfikacja DNA HPV dokonywana jest jakościowym testem opartym na metodzie łańcuchowej reakcji polimerazy w czasie rzeczywistym (Real-Time PCR). Test rozróżnia HPV HR typów 16,18 i 45 oraz wykazuje obecność innych wirusów HR z grupy A (31, 33, 52, 58) oraz B (35, 39, 51, 56, 59, 66, 68), raportując je jako „inne HPV HR A” oraz „ inne HPV HR B ”. Podwójne, jednoczasowe, cytochemiczne, barwienie białek p16 (p16INK4a) i Ki-67 pozwala na wykrywanie komórek, w których doszło do zaburzenia cyklu komórkowego na skutek zakażenia wirusem HPV o wysokim potencjale onkogennym. Białko p16 (białko supresorowe nowotworu, kodowane przez gen INK4a) uczestniczy w kaskadzie sygnałów hamujących replikację podczas różnicowania komórkowego. W dojrzałych komórkach nabłonka poziom p16INK4a jest obniżony do ledwie wykrywalnego. Natomiast w komórkach raka szyjki macicy, gdzie onkogenne wirusy HPV rozpoczęły transformację, poziom p16 jest znacznie podwyższony. Ki-67 jest markerem proliferacji komórkowej nasilonej w procesie nowotworzenia. Barwienie jest szczególnie przydatne w stanach granicznych, ASC-US (atypowe komórki nabłonka płaskiego o nieokreślonym znaczeniu), gdy zmiany morfologiczne nie są wyraźne. W zmianach o charakterze LSIL (małego stopnia zmiany w komórkach nabłonka płaskiego, CIN 1 wg Bethesda) barwienie pozwala na rozróżnienie infekcji incydentalnej od transformacji nowotworowej komórek.
